細胞汙染挽救

     對於貼壁生長的細胞 ，相對來說比較簡單但也很麻煩 。以下我主要討論貼壁生長的細胞 。

     在討論之前 ，大家首先要有一個概念 ，即潔淨區 ，並不是沒有細菌 ，而是細菌的數量非常少 ，國家標準100級的潔淨標準是浮遊菌數不得超過5個每立方米 ，沉降菌數不得超過1個每培養皿.而國外的標準比我國的還要高一點 ，要求的數量更少 。

     所以在我們的潔淨操作台裏 ，並不是真正一個細菌都沒有的 ，所以在操作的時候還是要盡量利索迅速地完成操作 。盡量減少進入培養體係細菌的數量 。

     所以處理細菌汙染的重要原則就是 ：無限地稀釋細菌的濃度 ，無限地減少細菌的數量 ！

1）將汙染的培養液倒掉 ，轉燒瓶口 ，加入10mlPBS ，適當晃動清洗培養瓶 ，然後倒掉 。轉燒瓶口 。

2）繼續加入10mlPBS ，同樣方法晃動 ，清洗培養瓶 ，然後倒掉 。

3）繼續加入5mlPBS ，同樣方法洗瓶 ，主要是培養麵 ，然後倒掉 。

4）重複步驟3再洗 。

5）重複步驟3再洗 。

6）加入3-5ml雙抗 ，洗瓶 ，靜置3-5分鍾 ，然後吸出 。

7）加入3ml雙抗 ，洗瓶 ，靜置3-5分鍾 ，然後吸出 。

8）再加入5mlPBS洗瓶 ，然後吸出 。

9）加入10ml培養液 ，加入2ml雙抗 ，放置培養箱培養 ，5小時之後 ，倒掉培養基 ，加入PBS洗瓶兩次 ，然後加入胰酶消化 ，吹打後置於離心機800-1000r/min離心 ，然後洗一次 。置於新的培養瓶裏培養 ，培養體係加入2ml雙抗 。

10）24h之後 ，視情況換液 ，若仍然汙染嚴重 ，培養基渾濁 ，重複以上步驟 ，若看不到汙染物 ，則繼續步驟1) 3） 4） 6） 8） ，然後加入培養液培養 ，培養體係加入2ml雙抗.

11)24h之後 ，若仍汙染嚴重 ，可再重複一次 ，若還汙染隻能棄之（不過一般沒有出現這種情況） ，若鏡下不見汙染物 ，則換液PBS洗瓶 ，正常培養 。

     以上方法主要是針對貼壁生長的細胞 ，在操作的過程中 ，一定要小心操作動作 ，輕柔緩慢 ，切忌大動作魯莽 。防止細胞脫落 。以上方法操作得當 ，基本上都能救活你的細胞 。當然如果你的細胞仍有富餘或者凍存的 ，我還是建議你把汙染的扔掉 ，再複蘇方便省事 。