【技術視頻】細胞複蘇與凍存

細胞凍存和複蘇技術是細胞培養過程中較為基礎的實驗操作 ，此舉對於細胞的保種以及細胞活力的維持有著重要意義 。

關於此實驗也可以參考以下技術文章 ：https://www.daucell.cn/tech_support/shownews.php?id=40

細胞複蘇與凍存操作步驟 ：

1.將凍存的細胞從液氮罐中取出

2.移至37℃水浴中 ，使細胞迅速融化

3.用酒精給手消毒

4.將所需培養基 ，要複蘇的細胞用酒精消毒後 ，拿入工作台並放置酒精燈附近

5.離心管上寫好細胞名稱

6.用鑷子小心撕掉封口膜

7.打開培養基及離心管蓋子

8.用移液槍吸取2ml培養基至離心管中 ，蓋子過火後立馬蓋上

9.用鑷子擰開凍存管蓋子

10.1ml移液槍吹打凍存液後轉移至離心管

11.吹打幾下 ，混勻培養基和凍存液管

12.離心機1500r ，3min離心存液管

13.點燃酒精燈

14.從離心機裏取出細胞

15.配平離心管按順序放好

16.離心管底部為細胞沉澱 ，酒精消毒放入工作台

17.拿出培養瓶 ，寫好細胞名稱 、日期 、培養基等基本信息

18.用移液槍移取5ml培養基於培養瓶中

19.棄去上清 ，用移液槍吸掉剩餘廢液

20.1ml培養基重懸細胞並轉移至培養瓶中

21.蓋上蓋子 ，放入培養箱

22.將培養瓶按照十字晃動 ，讓細胞均勻分散

23.動作緩慢的放入培養箱

24.將血清和DMSO酒精消毒後放入操作台

25.小心去除封口膜

26.準備一管9mL的血清

27.吸取1mLDMSO緩慢加入血清中混勻

28.凍存液做好標記

29.將離心後的細胞和凍存管酒精消毒後放入操作台

30.在凍存管上詳細標注細胞名稱 ，凍存時間 ，操作人員等信息

31.去除上清 ，用移液槍吸掉剩餘廢液

32.加入1mL配製好的凍存液重懸細胞

33.將細胞轉移至凍存管

34.將凍存管用封口膜封口後轉移至梯度降溫盒中

35.將梯度降溫盒轉移至-80℃冰箱放置過夜

36.小心取出液氮罐凍存架

37.取出將要放置的凍存盒

38.將梯度降溫盒中的細胞放入凍存盒

39.放回凍存盒

40.放回凍存架

細胞複蘇與凍存1

細胞複蘇與凍存2

細胞複蘇與凍存3

細胞複蘇與凍存4