細胞功能實驗

細胞功能實驗服務主要包括基因過表達 、基因沉默 、細胞增殖 、細胞凋亡 、細胞遷移與侵襲 、雙熒光素酶報告基因係統等項目 。

目的基因過表達是研究基因功能常用的手段之一 。基因過表達穩定細胞係已經廣泛應用於生物學研究 ，包括基因調控 、蛋白質工程 、重組抗體製備 、藥物研發等 。將目的基因通過轉染或病毒包裝的方法 ，能夠實現目的基因過表達的穩定細胞係 。

• 載體構建-將目的基因克隆入高效表達載體中 。

• 轉染或轉導-通過電轉染 、轉染試劑（脂質體等）或病毒包裝的方法將外源基因轉染或轉導入細胞 。

• 篩選-根據表達載體的篩選標記 ，優化篩選藥物濃度 ，進行陽性細胞克隆篩選 ，如嘌呤黴素 、G418篩選等 。

• 擴大培養-挑取單克隆細胞 ，進行擴大培養 。

• 目的基因表達檢測-通過PCR 、qRT-PCR 、Westernblot等方法 ，從DNA 、mRNA 、蛋白水平進行目的基因的表達檢測 。

• 穩定性驗證- 所有過表達細胞係都經過了嚴格的測試和驗證 ，其穩定性能保持25代以上 ，且保證均無支原體汙染 。

• 功能性驗證- 對外源基因表達蛋白進行功能性檢測 。GPCR過表達細胞株一般采用報告基因方法和（或）胞內鈣流檢測方法進行活性測定 。

RNA幹擾(RNA interference, RNAi) 現象是一種進化上保守的抵禦轉基因或外來病毒侵犯的防禦機製 。將與靶基因的轉錄產物mRNA存在同源互補序列的雙鏈RNA(double strand RNA, dsRNA) 導入細胞後 ，能特異性地降解該mRNA ，從而產生相應的功能表型缺失 。RNAi提供了一種經濟 、快捷 、高效的抑製特異基因表達的技術手段 ，有助於研究該基因在生物模型係統中的作用 ，是研究基因功能的重要工具 ，並且逐步成為病毒性疾病 、遺傳性疾病以及腫瘤等的基因治療研究的一種手段。現今發現的主要起幹擾作用的RNAi主要有兩類小分子RNA ：一類是microRNA（miRNA） ；另一類是siRNA（small interfering RNA） 。

siRNA製備的方法一般有 ：化學合成siRNA ，哺乳動物細胞載體shRNA克隆和慢病毒載體shRNA克隆 。 哺乳動物細胞構建shRNA質粒直接轉染或通過病毒包裝後轉染細胞 ，並對轉染細胞進行陽性鑒定和轉代細胞株的培養 ，最終實現對特定基因特異性敲低的作用 。

基因沉默服務的優勢 ：

• 慢病毒載體類型 ：最齊全的病毒包裝載體

• 安全性 ：最安全的第三代/第四代慢病毒包裝體係

• 超高滴度 ：精心優化的啟動子和慢病毒包裝細胞 ，實現超高滴度的病毒包裝

• 載體容量 ：獨特的載體設計 ，最大可高效包裝

細胞增值 ：是生物體的重要生命特征 ，細胞以分裂的方式進行增殖 ，通過分裂 ，可以將複製的遺傳物質 ，平均地分配到兩個子細胞中去 ，是生物體生長 、發育 、繁殖和遺傳的基礎 。單細胞生物 ，以細胞分裂的方式產生新的個體 。多細胞生物 ，以細胞分裂的方式產生新的細胞 ，用來補充體內衰老和死亡的細胞 ；同時 ，多細胞生物可以由一個受精卵 ，經過細胞的分裂和分化 ，最終發育成一個新的多細胞個體 。

細胞增殖檢測的最準確方法之一 ，就是直接測定DNA的合成 ，同時也是測定物質毒性 、評估藥物安全 、細胞健康的基本方法 。通過檢測細胞增殖活性 ，可以指示腫瘤細胞增殖活性 、目的基因瞬轉/穩轉細胞係的細胞增殖活性 ，在小分子化合物/多肽等藥物篩選及功能安全性研究 、中藥/中間體等藥物篩選及功能安全性研究 、目的基因過表達的基因功能研究 、目的基因RNAi幹擾的基因功能研究中發揮重要作用 。

細胞凋亡（Apoptosis）是指為維持內環境穩定 ，由基因控製的細胞自主的有序的死亡 。作為細胞的一種基本生物學現象 ，細胞凋亡是機體為更好地適應生存環境 ，而主動爭取的一種死亡過程 ，它涉及一係列基因的激活 、表達以及調控等的作用 ，一般過程包括4個階段 ，即 ：誘導啟動 、細胞內調控 、實施和凋亡細胞的吞噬搬運 。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡類型 ，而且具有重要的生物學意義及複雜的分子生物學機製。

腫瘤細胞遷移（migration）與侵襲（invasion）檢測均為能夠間接反映腫瘤遷移或侵襲能力 ，或特定情況下的遷移或侵襲能力的實驗 。通過研究腫瘤細胞的遷移與侵襲能力 ，能夠為探究腫瘤發生及轉移的機製提供重要的實驗支撐 。我司具有多年細胞檢測經驗 ，可以為客戶提供多種高端優質服務 ，並能夠根據客戶的具體需求進行實驗設計與規劃 ，為客戶提供完美的解決方案 。

雙熒光素酶報告基因實驗係統采用熒火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶組成雙熒光素酶報告基因實驗係統 。實驗中，報告基因（熒火蟲熒光素酶）活力的改變 ，與基因表達的特定實驗條件相關 ；而示蹤基因（海腎熒光素酶）作為內對照 ，使測試不被實驗條件變化所幹擾 ，減少內在的變化因素所削弱的實驗準確性 ，如 ，培養細胞的數目和活力的差別 ，細胞轉染和裂解的效率等 。熒火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶測試的組合 ，提供了雙遺傳報告基因應用的理想測試係統 。

雙熒光素酶報告基因係統應用領域 ：

• 潛在啟動子/啟動子核心區域檢測 。

• 潛在增強子/抑製子等調控子核心元件檢測 。

• 啟動子區可能的轉錄因子結合位點檢測 。

• 啟動子/增強子與轉錄因子的相互作用 ，病毒/細胞相互作用 。

• 藥物等化學誘導因素對啟動子活性的調節（抑製或增強） 。

• 射線等物理誘導因素對啟動子活性的調節（抑製或增強） 。

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