【科普】小鼠調節性T細胞鑒定方案

小鼠調節性t細胞(Treg)鑒定步驟

配色方案

小鼠Treg鑒定所需流式抗體

小鼠Treg鑒定所需輔助試劑

樣本管設置

實驗步驟

一 、小鼠脾細胞分離步驟 ：

1.取小鼠脾髒 ，置於PBS中 ；

2.可用注射器柱塞研磨脾髒 ，並通過70μm細胞過濾器過濾 ，收集濾液到15mL離心管 ；

3.300g離心5min ，棄上清 ，得到紅色細胞沉澱 ；

4.加2mL 1x紅細胞裂解液 ，重懸沉澱 ，室溫下裂解2~3min ，再加10mL PBS ，終止裂解反應 ；

5.300g離心5min ，棄上清 ，得到白色細胞沉澱 ，用細胞染色緩衝液重懸細胞 ，並做細胞計數 ，調整細胞濃度為1×107/mL 。

二 、細胞固定破膜實驗步驟 ：

（下麵是全染管的實驗步驟 ，空白組不加抗體 ，單染管隻在對應步驟加對應流式抗體 ，同型對照組將相應的流式抗體替換成同型對照 ，所有組都要固定破膜）

1.根據檢測的量，稀釋Foxp3檢測專用的固定劑和破膜劑；

2.取100μL小鼠脾髒細胞（1×106個細胞） ，置於流式管內 ，加入1Test的FITC Anti-Mouse CD4（E-AB-F1097C）和1Test的APC Anti-Mouse CD25（E-AB-F1102E）混勻 ，4℃孵育30min ；

3.孵育完畢後，加入1mL細胞染色緩衝液 ，300g離心5min ，棄上清 ，再加入100μL細胞染色緩衝液 ，重懸細胞 ；

4.加入1mL固定劑 ，渦旋混勻 ，4℃反應30min ；反應完成後 ，600g離心5min ，棄上清 ；

5.加入2mL破膜劑 ，渦旋混勻 ，600g離心5min ，棄上清 ；

6.重複步驟5 ；

7.加入100μL破膜劑 ，重懸細胞 ，再加入PE Anti-Mouse Foxp3（E-AB-F1238D） ，混勻後室溫孵育30min ；

8.加入2mL破膜劑 ，600g離心5min，棄上清 ；

9.加入200μL細胞染色緩衝液 ，重懸細胞，即可上機檢測 。

解析 ：

▶ 圈門路徑 ：

首先 ，根據FSC-A和SSC-A圈中目的細胞 ；

其次 ，利用光散射特性 ，去黏連 ，得到單細胞 ；

再次 ，通過CD4 ，確定CD4+輔助T細胞 ；

最後 ，通過CD25+/Foxp3+ ，確定出Treg細胞亞群 。

任何有關“流式實驗”或“Treg研究”的疑問 ，可以給我們留言 ，我們將為大家詳細解答哦~

免責聲明 ：內容來源於網絡 ，版權歸原作者所有 。本文僅作信息交流之目的 ，文中觀點不代表本網站觀點 。如涉及版權問題 ，請及時聯係我們刪除 。