流式細胞術檢測細胞凋亡

流式細胞術檢測細胞凋亡（Annexin V-FITC/PI 雙染法）

一 、原理

1 、Annexin V-FITC

      在正常細胞中 ，磷脂酰絲氨酸（PS）隻分布在細胞膜脂質雙層的內側 ，而在細胞凋亡早期 ，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內側翻向外側 。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白 ，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力 ，故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合 。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一 。將Annexin V進行熒光素（FITC）標記 ，以標記了的Annexin V作為熒光探針 ，利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞早期凋亡的發生 。

2 、PI

    碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料 ，它不能透過完整的細胞膜 ，但對凋亡中晚期的細胞和死細胞 ，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅 。

3 、總結

    因此 ，將Annexin V與PI匹配使用 ，就可以將處於不同凋亡時期的細胞區分開來 。

二 、結果分析

    在二維散點圖上 ，Annexin V是X軸 ，PI是Y軸 ，十字門將圖片分為四個象限 。X軸及Y軸的數值表示的是熒光信號強度或散射光信號相對強度 ，因此可以將其染色劃分為陽性和陰性 。其中根據Annexin V染色分為左右兩部分 ，右側（Q2/3）為Annexin V染色陽性 ；根據PI染色分為上下兩部分 ，上方（Q1/2）為PI染色陽性 。一般認為Annexin V單染的細胞是凋亡早期的細胞 ，PI單染的細胞是已經死亡的細胞 ，而雙染是凋亡中期的 。

  左上象限Q1 ：(Annexin V-FITC)-/PI+ ，此區域的細胞為壞死細胞 。也可能有少數的晚期凋亡細胞在其中 ，甚至機械損傷的細胞也包含其中 。

  右上象限Q2 ：(Annexin V-FITC)+/PI+ ，此區域的細胞為晚期凋亡細胞 。

  右下象限Q3 ：(Annexin V-FITC)+/PI- ，此區域的細胞為早期凋亡細胞 。

  左下象限Q4 ：(Annexin V-FITC)-/PI- ，此區域的細胞為活細胞 。

  細胞凋亡率 ：Q2與Q3象限百分率的和 。