細胞培養基礎篇-複蘇

細胞培養看似簡單 ，但實則有很多細節需要注意 ，今天就從最基礎的細胞複蘇說起 ，當然內容主要還是針對新入門的“學徒” ，如有不足之處 ，也請廣大站友不吝賜教 。


操作步驟 ：

1.從液氮罐中取出凍存管 ，放入37度水浴鍋中融化 ，800-1000rpm離心3-5min ；

2.慢慢吸去上清 ，加入適量完全培養基重懸細胞團 ，轉移至培養皿或細胞瓶 ；

3.補足完全培養基 ，放37度培養箱中培養 。

注意細節 ：

1.從液氮罐中拿出凍存管時要做好防護工作 ，特別是避免液氮濺到眼睛裏 ，有條件的實驗室可以配備防凍手套和護目鏡 ；

2.取出的凍存管要先確認管內沒有液氮 ，再放入37度水浴鍋 ，有液氮的情況下很容易因為管內壓強突然增大而導致凍存管炸裂 ，輕則細胞無法使用 ，重則傷及實驗人員 ；

3.融化過程中要不斷輕輕搖晃凍存管 ，使其盡快融化 ，但搖晃程度要把握得當 ，不能讓水浴鍋中的水滲進凍存管中 ；

4.離心的具體轉速和時間視細胞而定 ，通常難養的細胞需要降低轉速 ，縮短時間 ，以減少離心對細胞的傷害 ；

5.部分對離心敏感的細胞（主要是原代細胞）可以采用融化後不離心，直接重懸後補足培養基培養 ，待其貼壁後再換液去掉凍存液中DMSO的方式處理 ；

6.如果凍存細胞量不多 ，可以在凍存管蓋上標注離心方向 ，以便確定離心後細胞團位置 ，吸去上清時調整凍存管角度 ，使細胞團位於最下方 ，可以盡量減少細胞損失 。