細胞計數
在細胞培養工作中
，常需要了解細胞生活狀態和鑒別細胞死活
，確定細胞接種濃度和數量以及了解細胞存活率和增殖度
，如用酶消化製備的細胞懸液中細胞活力的鑒別
，凍存細胞複蘇後的活力檢測等
。細胞懸液製備後
，常用活體染料台盼藍對細胞進行染色
，進行細胞計數
。台盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜
，故活細胞不著色
。而死亡細胞的細胞膜通透性增高
，可使染料進入細胞內而使細胞著色（藍色）
。細胞計數一般用血細胞計數板
，按白細胞計數方法進行計數
，便於確定細胞的生活狀況
。
所需物品
Ø 0.4％台盼藍溶液
Ø 無水乙醇或95％乙醇溶液
Ø 脫脂棉
Ø 相差顯微鏡
Ø 試管
、吸管
、毛細吸管
Ø 細胞計數板
細胞計數方法
1. 將動物細胞用PBS製備成適當濃度的細胞懸液備用
。
2. 用無水乙醇或95％乙醇溶液擦拭計數板後
，用綢布擦淨
，另擦淨蓋玻片一張
，把蓋片覆在計數板上麵
。
3. 用滴管吸取0.4％台盼藍染液
，按1∶1比例加入細胞懸液中
。從計數板邊緣緩緩滴入
，使之充滿計數板和蓋片之間的空隙中
。注意不要使液體流到旁邊的凹槽中或帶有氣泡
，否則要重做
。稍候片刻
，將計數板放在低倍鏡下（10×10倍）觀察計數
。
4. 按圖計算計數板的四角大方格（每個大方格又分16個小方格）內的細胞數
。計數時
，隻計數完整的細胞
，若聚成一團的細胞則按一個細胞進行計數
。在一個大方格中
，如果有細胞位於線上
，一般計下線細胞不計上線細胞
，計左線細胞不計右線細胞
。二次重複計數誤差不應超過±5％
。鏡下觀察，凡折光性強而不著色者為活細胞
，染上藍色者為死細胞
。
5. 計完數後
，需換算出每ml懸液中的細胞數
。由於計數板中每一方格的麵積為0.01cm2
，高為0.01cm
，這樣它的體積為0.0001 cm3
，即0.1 mm3
。由於1ml＝1000 mm3
，所以每一大方格內細胞數×10,000＝細胞數/ml
，故可按下式計算
：
細胞懸液細胞數/ml＝4個大格細胞總數/4×10,000
6. 如計數前已稀釋
，可再乘稀釋倍數
。
7. 計數細胞後
，計算細胞懸液濃度並求出存活與死亡細胞數的比例
。
注意事項
1. 向計數板中滴細胞懸液時要幹淨利落
，加量要適當
，過多易使蓋片漂移
，或淹過蓋片則失敗
，需重做
；過少易出現氣泡
；不理想時
，應重做
；
2. 鏡下計數時
，若方格中細胞分布明顯不均
，說明細胞懸液混合不均勻
，需重新將細胞懸液進行混合
，再重新計數
。
3. 計數時
，對於位於邊線或交界處的細胞/細胞團
，遵循“計上不計下
，計左不計右”的規則
；
4. 一個細胞團計做一個細胞
。
